Стефилококк инфекцияларын диагностикалау

Қарамастан стафилококтар тиесілі қатарына оңай обнаруживаемых және распознаваемых микроорганизмдердің қажет етпейтін күрделі диагностикалық әдіс-тәсілдерді, оларды анықтау, практикалық жұмыста микробиологи әлі күнге дейін қиындықтарды белгілеу кезінде олардың себептік рөлін бірқатар түрлі аурулардың. Бір жағынан, болуы патогенді стафилококктар, обнаруживаемое зерттелетін материалда жоқ, сенімді дәлелі болып табылады, олардың этиологиялық маңызы бар. Екінші жағынан, ескере отырып, сан алуан көріністердің биологиялық белсенділігін осы микробтардың тәуелді әр түрлі емес, әрдайым берілетін есеп факторлардың кең олардың өзгергіштік әсерінен дәрілік заттардың және өзінің макроорганизма, өте қиын жағдай анықтау және олардың ықтимал патогенділік. Соңында, үшінші себебі қандай байланысты стафилококтар өкілдері болып табылады қалыпты микрофлораның тобынан шартты патогенді микроорганизмдер, сонымен қатар непатогенными, патогенді өкілдері мекендейді организмде адамдар, распространяясь бұл өте біркелкі емес, әр түрлі учаскелері адам денесінің.

Егер бөлу патогенді стафилококкты, қан, ауру адамдарды және әртүрлі қуыстары, қабылданды деп саналсын стерильді, көпшілігінде жағдайлары болуы мүмкін дәлел оның рөлін ретінде қоздырғышының онда болуы стафилококктарға арналған шырышты аңқа, мұрын және т. б. тіпті » айқын болезненном жай-күйі, оларды талап етеді үлкен сақтықты зерттеуші қорытындылар этиологиясы туралы деректерді аурулар.

Сондықтан, әрине, мүмкін емес жалпы ұсыныстар ретінде диагностикалау кезінде түрлі стафилококтік, сондай-ақ кезінде микробиологиялық зерттеулер адам денесінің және әр түрлі объектілердің сыртқы орта. Кең ауқымды пікір алмасу арасындағы микробиологами ғылыми мекемелердің ғылыми және практикалық зертхана жүзеге асырылатын съездерде және конференцияларда проблемаларына арналған стафилококтік, сондай-ақ жеке байланыстары еді, тиіс әкелуі мүмкін белгілі бір көзқарастар әр түрлі зерттеу әдістері, ұсынылатын бөлу және идентификациялау үшін стафилококктар. Алайда, көптеген сұраныстар келіп түскен зертханалары СЭС және емдеу мекемелері көрсетеді нақты қиындықтар туындаған пайда болатын зерттеушілердің шешу кезінде әр түрлі мәселелерді микробиологиялық диагностикалау стафилококктар, ал бірқатар микробиологиялық мекемелердің бытуют тағы кейбір ескірген әдіс-тәсілдері әкелетін дұрыс бағалауы, тіпті досадным недоразумениям.

Маңызды шарты тиімді зертханалық диагностика болып табылады циклоферонның анықтау сандық және сапалық өлшемдерін ұстау патогенді стафилококктар зерттелетін материалда. Осыны негізге ала отырып, менің ойымша, қажетті мынадай әдістерін бірқатар негізгі микробиологиялық зерттеулер, неғұрлым қарапайым және қол жетімді әрбір практикалық және ғылыми зертханалар, олар біз пайдаланамыз көптеген жылдар бойы.

НЕГІЗГІ ПРИНЦИПТЕРІ АНЫҚТАУ ЖӘНЕ СӘЙКЕСТЕНДІРУ ПАТОГЕНДІ СТАФИЛОКОККТАР

Алдын-ала диагностика стафилококктар негізделуі мүмкін бактериоскопическом зерделеуде препараттар жағынды, Грам бойынша боялған. Патогенді стафилококктар, басқа гроздевидного орналасқан, сипатталады дұрыс сфералық нысаны жасушалар. Табу стафилококктар, ішіндегі жасушалардың мүмкіндік береді бар болуы туралы стафилококты инфекция. Көпшілігі үшін дәл анықтау патогенді табылған стафилококктар талап етіледі бөлу бұл микроорганизмдер таза мәдениет тұқым себу арқылы зерттелетін материалды тығыз қоректік орта.

Қазіргі уақытта ассортимент дифференциалдық, элективті және жинақтаушы орталар үшін ұсынылған бөлу патогенді стафилококктар, өте елеулі және кеңейтілуде. Көптеген зерттеушілер білу негізінде негізгі биохимиялық сипаттамалары мен қоректік қажеттілігін патогенді стафилококктар құрастыру кезінде ортаның арттыруға ұмтылады, олардың высеиваемость және қамтамасыз ету мүмкіндігі оларды сандық есепке алуға сенімді тәсілі ажырата білу ықтимал ауру тудыратын стафилококтар жылғы сапрофиттердің.

Тұтыну сұйық жинақтаушы орталар үшін бастапқы бөлу стафилококктар орынсыз, өйткені айырады зерттеуші мүмкіндігін сандық бағалаудың мазмұнын микробтарды тексерілетін объектілерде, ал кездейсоқ ластанулар ықпал етеді қателер. Әсіресе, бұл осындай зерттеулер қалай табу носительства патогенді стафилококктар, онда дәлелі болып табылады тек жаппай өсуі, не анықтау этиологиялық рөлін осы микроорганизмдердің «тағамнан улану немесе сыртқы қабыну процестері. Егер әңгіме зерттеуге қан, сондай-ақ туралы сол аз ғана жағдайларда, кейде анықтау қажет, тіпті бірлі-жарым өміршең дарақтар осы микробтарды, мысалы тиімділігін бақылау кезінде дезинфекциялау, тексеру зарарсыздыққа немесе титрационных егістік болса, онда мұндай жағдайларда пайдалану жинақтаушы ортаның әбден ақталған.

Үлкен санының әр түрлі қоректік орталарды, опробованных үшін бастапқы бөлу стафилококктар, практикада ақтап, ;1′, өзіне аз. Қарапайым питательный агар (рН 7,2 7,4) , дайындалған қосу арқылы 2% агар-агар — мясопептонному бульону немесе триптическому перевару Хоттингера пайдаланылуы мүмкін зерттеу кезінде экссудатов жабық қуыстарын. Стафилококтар өседі арқылы 18-24 сағ инкубация кезінде 37° С-түріндегі тегіс керемет бастап тегіс шеттері непрозрачных және сәл дөңес колониялар. Сипаты пигменттің анықталады, жақсы білім тәуліктік ұстап кесе бөлме температурасында (20° С) жарықта. Егер зерттелетін материалда бар посторонняя флора, онда сыртқы түрі бойынша колония стафилококктар мүмкін трудноотличимы.

Ішу қан агар ағашы мүмкіндік береді, сонымен анықталған пигмент, анықтау және гемолитическую белсенділігі стафилококктар. Бұл есте сақтау қажет гемолитикалық қабілеті айқындалатын чашках с кровяным агармен, көптеген факторларға байланысты — түрі қан, оның концентрациясы, болуы онда антитоксинов қабатының қалыңдығын ортаның көмірқышқыл газының атмосферада өсіру, толықтық егуге қатысу сипаты мен ілеспе флора және т. б.

Іріктеу кезінде колониядан бастап қан агар ағашы қажет отвивать ретінде гемолитические жоқ болатын гемолиз, әсіресе, егер зерттеу жүргізіледі ортада адам немесе ат күшінен қанмен, ал гемолиздың жоқтығы осындай ортада емес, мүмкіндік береді жасасуға жоқтығы туралы жалпы гемолитикалық белсенділік. Сондықтан, пайдалану қан агар ағашы үшін бастапқы себу орынды ғана нысандарды тексеру кезінде, құрамында бөгде микрофлораның және мүмкіндігінше қосуға қоректік ортаға қан қоян немесе қой.

Егер зерттеу жүргізіледі іріңнің ашық жаралар немесе отделяемого ойық жаралар немесе жыланкөз болса, пайдалану керек элективно-дифференциалды ортасы стафилококктар — сарыуыз-тұзды агармен (ЖСА) Г. Н. Чистовича. Элективность қоршаған ортаны қорғау қамтамасыз етіледі жоғары мазмұнымен хлорлы натрий, ал қосылған жұмыртқа сарысы анықтауға лецитовителлазную белсенділігі, ол көрсеткіштерінің бірі болып табылады патогенді стафилококктар және осы ЖСА нақты саралайды патогенді өкілдерінің қарағанда, қанды агар. Дайындау ЖСА қиын емес.

Заготовляют впрок және автоклавта стерильдейді кезінде 120 °С 20 минут ішінде питательный агар (МПА немесе Хоттингера) рН 7,2—7,4 қамтитын 10% ас тұзы. Пайдаланар алдында тұзды питательный агар растапливают, остужают дейін 45-50 °С және қосады, оған көлемі бойынша 20% стерильді желточной жүзгін (1 сары уыз тауық жұмыртқа 200 мл физиологиялық ерітінді) . Жақсы эмульсирования болуы тиіс колба шыны бусами. Кейін мұқият араластыру ортаға разливают 20-25 мл шыныаяқ, мүмкін тоңазытқышта бірнеше күн ішінде.

Керек жаппай егу зерттелетін материалды кесе отырып, ЖСА, ал инкубацию жүргізуге 2 тәулік бойы болған 35-37° С. Посторонняя флора күрт подавляется, стафилококтар, сол ЖСА өседі іс жүзінде таза мәдениет. Тікелей кезде кесе айналасында колониялар байқалады білімі радужных венчиков және лай аймағы — лецитовителлазная реакциясы. Мұндай колония, кем дегенде екі әр себу, отвивают арналған қиғаш мясо-пептонный агар үшін кейіннен тексеру выросших дақылдарының реакция плазмо-коагуляция.

Болдырмау үшін қателерді анықтау желточной реакциялар, ескеру, бұл кейде байқалады ортаның лайлануы жоқ радужного жиек, бұл жағдайда сынама лецитовителлазу теріс болып саналады. Егер колония өскен арналған ЖСА бермейді лецитовителлазной реакциялар, яғни қоршалған радужным венчикпен, бірақ өсім бар стафилококктар, онда оларды да деп санайды күдікті және сондай-ақ, отвивают кем дегенде екі осындай әрбір егу тостаған қарапайым қоректік агармен дақтардың диаметрі 5-10 мм. Кейін тәуліктік инкубациялау кезінде 37° С алынған макроколонии тексереді реакция плазмоагглютинации, ол үшін микробную массасын размешивают ілгекпен шыныда да тамшыларда жазылады цитратной кроличьей немесе адамзат плазма, ерітілген 1: 4. Білім ұлпа ескереді ішінде 30с—1 мин. болған Кезде плазмоагглютинации мұндай штамдар деп санайды күдікті және отвивают арналған қиғаш агар үшін одан әрі зерттеу коагулазной реакциялар. Мұндай іріктеу саны пропускаемых штаммдарының патогенді стафилококктар адам текті аз, мәдениет, бөлінген жануарлар, талап етіледі тексеруге реакция плазмокоагуляции.

Кейбір зерттеушілер алып, теріс немесе күмәнді нәтижесі қалдырады, пробиркалар үстелде. Бұл болмайды, өйткені ұйыту плазма неғұрлым кешірек мерзімдерде сипатта болуы мүмкін емес, өзіне тән сипатта болады және оны қабылдауға болмайды.

Стафилококтар беретін оң коагулазную сынама ретінде қарастырылуы тиіс әлеуетті патогенді, болуына немесе болмауына қарамастан, оларда гемолитических қасиеттері мен сипаты пигмент, олардың жатқызады түрі St. aureus және одан әрі жүргізеді фаготипизации және тексеру антибиотиктерге сезімталдығы.

Тереңдетіп оқыту стафилококктар көрсеткендей, негізгі белгісі патогендігі — коагулазная реакция ұшырауы мүмкін өзгергіштіктің әсері кезінде әр түрлі факторлардың (Г. Н. Чистович, 1961; Е. М. Падерина, 1966) , сондықтан кейбір жағдайларда, бөлу кезінде коагулазонегативных стафилококктар в монокультуре келген патологиялық ошақтарын орынды зерттеп, оның басқа да белгілері ықтимал болезнетворности және, ең алдымен, қабілеті ферментировать маннит да анаэробты жағдайларда. Бұл арасында коагулазоотрицательных бөлігі дақылдардың білу қабілеті расщеплять маннит да анаэробты жағдайларда (8,4% —деректері бойынша а. А. Акатова және М. Л. Хатеневер, 1974) .

Анықтау ферментация маннит да анаэробты жағдайында техникалық өте қарапайым және жолымен жүзеге асырылады егу уколом зерттелетін дақылдардың пробиркалар жоғары столбиком полужидкого аган Хоттннгера, құрамында 1% маннит және 0,004% индикатордың бромкрезолпурпура немесе бромтимолблау (рН == 7,2) . Осы ортаға себу алдында «әрекеттенеді» , т. е. су моншасында қайнатады, тез суытып, содан соң егу құяды қабатымен стерильді даярлаудағы вазелин майы. Себінділерді кезінде 37 °С-5 күн ішінде. Алайда, айтарлықтай, оның ішінде жағдайлардың нәтижелері ескерілуі мүмкін арқылы тәулігіне.

Сонымен қатар, реакция плазмокоагуляции үлкен мән сатып алынған тағы бір маңызды қабілеті стафилококктар, сипаттайтын олардың ықтимал патогенділік, —дезоксирибонуклеазная белсенділігі. Көптеген зерттеушілер туралы хабарлайды жоғары корреляция бұл белгінің бастап коагулазной белсенділігі және токсигенностью зерттелетін дақылдар; хабарлауынша, стафилококтар, бөлінген патологиялық материалдан, әдетте, ие ДНҚ-азой. Коагула-зопозитивные штамдары алынған тасығыштарды, болмауы да мүмкін осы ферментінің, және, әдетте, болмауы дезоксирибонуклеазной белсенділігін үйлеседі төмен биохимиялық қабілеті және атоксигенностью осындай дақылдар стафилококктар.

Бақылаулар бойынша кейбір зерттеушілердің арасында коагулазонегативных стафилококктар штаммдарының, бірақ обладавших басқа да белгілері патогендігі бөлінген бірқатар жағдайларда науқастардан түрлі гнойными жұқпалы дезоксирибонуклеазную белсенділігі nude celebs 10-нан 29% — ға, мұндай дақылдар (и. И. Панышева және қызметкері., 1967; Franklin. авт., 1966; Lierd және Golde, 1970) .

Қазіргі уақытта бұл тест бола алады сенімді дифференциалдық белгісі арасындағы патогенді және непатогенными стафилококками және сол уақытта көмектесе алады саралау дәрежесі патогенді коагулазопозитивных штаммдарының және, әрине, тартады назар коагулазонегативным, бірақ иеленуші осы ферментом дақылдар стафилококктар және бірқатар жағдайларды жатқызуға мүмкіндік береді соңғы — болезнетворным нысандар үлкен сенімділікпен.

Анықтау әдістемесі дезоксирибонуклеазной белсенділігін несложна, оның негізін положен әдісі Джеффриса. Дайындайды впрок 2% МПА (рН 8,6) қамтитын ДНК (2 мг/мл , разливают бойынша флаконам және стерильдейді текучим бумен 30 мин ішінде ыдысқа құяр Алдында » тостаған ортаға қосады CaCIa (0,8 мг/мл) . «Подсушенную ортаға засевают тәуліктік мәдениет стафилококктар. Инкубациядан кейін ішінде 18-20 сағ 37°, бетіне ортасын құяды IN НС1 ерітіндісі және 7-10 мин ескереді аймағының ағару, бағалайды крестами (Н. Б. Мордвинова. авт., 1967) .

Біз ұсынылды неғұрлым үнемді әдіс анықтау үшін ДНҚ-аздан микроорганизмдердің. Бұл тәсіл, басқа азайту 2 есе шығын ДНК әрбір тәжірибесін қолдануға мүмкіндік береді неғұрлым арзан низкополимерную нуклеиновую қышқылы, изготовляемую Олайнским зауыт химиялық реактивтер. Ұсынылып отырған әдістеме кеңінен сынақтан өткізіледі микробиология кафедрасында ЛСГМИ және сапасы бойынша сұраныс кем түспейді, жалпы қабылданған. Сондықтан біз келтіреміз, оның егжей-тегжейлі сипаттамасы.

Үшін жұмыс ерітіндісін дайындау ДНК, навеску нуклеиновой қышқылының есебінен 10 мг/мл орналастырады дистилденген суды қосады 0,5 мл 0,2% — ға (немесе 0,8%) ерітіндісін NaOH әрбір 10 мл су. Жақсы еріту ДНК қоспасы не қайнағанға дейін қыздырады су моншасында тұрақты перемешивании шыны таяқшамен, не қалдырады түн кезінде 37 °С термостатта. — Расплавленному және остуженному дейін 50 °С МПА қосады жұмыс ерітіндісі ДНК есебінен 1 мг/мл (9 мл МПА—1 мл ерітіндінің ДНК) , араластырады, разливают по10л(л пробиркалар, стерильдейді текучим бумен 30 минут бойы немесе автоклавта 0,5 атмосфера ішінде 20 мин. сақтау Мерзімі— 1-2 ай.

Кезде тәжірибе бағаналар аган ДНҚ-растапливают, су моншасында қосады 0,1 мл официнального стерильді 10% р-ра СаСЬ, араластырады және ғана төгеді қабаты жақсы кептірілген питательного аган да Петри және қайта кептіріп алады. Тәуліктік агаровую мәдениетін засевают кішкентай аталады (диаметрі тең 2-2,5 мм) немесе мөртабанмен репликатором артық емес 20-25 әшекейлер болдырмау үшін бірігу аймақтары деполимеризации ДНК. Кейін 18-20-сағаттық инкубация беті аган құяды 5 мл IN НС1 ерітіндісін және 3-5 мин ескереді аймағының ағару. Реакция бағалайды крестах.

Бұл ескеру керек, бұл қарқындылығы аймағын деполимеризации қатты ортада әрдайым емес сәйкес келеді, аз мөлшерде осы өнімнің ферментінің у зерттелетін стафилококктар сұйық орталарда.

Табу үшін фибринолизина пайдаланады бірнеше жетілдірілген әдісі Кристи оқу сыныбын.

Сәрсенбі Кристи—Чепмена бар келесі құрамы: ет сығындысы—0,45 г пептон—0,75 г, хлорлы натрий—1,2 г, агар—2,75 г, су—130 мл, рН ортаның == 7,0. Автоклавта стерилденеді және сақталады впрок.

Алдындағы тәжірибе ортаға растапливают, остужают-ден 50 °С-қа арттырады 15-20% стерильді цитратной адам плазма. Қоспасы жылытылуы су моншасында кезінде 65-70°С ішінде 2— 5 мин дейін пайда болған айқын мути, содан кейін стерильді шөлмектерге тостаған. Сыналатын мәдениет засевают «бар» 15-20 арналған шыны аяқты. Себінділерді кезінде 37 °С-Учитывается образование ағару аймақтары айналасында колония бастапқыда 14 сағ, содан кейін 24-48 сағ, себебі реакция түрлі мәдениеттер ағады неодинаково тез және бірқатар штаммдарының ол дамуда анағұрлым кеш мерзімдері.

Фибринолитический тест біз үшін өте жарамды айқындау үшін әлеуетті болезнетворности стафилококктар, бірақ бағалаймыз тек кешеніндегі басқа да белгілерімен белсенділік.

Гиалуронидазная белсенділігі анықталады әдісі бойынша Мак-Клина-да түрлендіру. М. Ш. Могилевтік және Л. С. Коган (1949) .

Ерітінді гиалуроната беретін қатысуымен 2 N сірке қышқылы типтік ұйыма, шөлмектерге құйылады 0,5 мл-ден стерильді пробиркаларға. Қосылады 0,5 мл тәуліктік мәдениет стафилококкты » пептонды суда. Контролями қызмет етеді: гиалуропат + дистилденген су және гиалуропат + незасеянная сәрсенбі. Қоспаны встряхиваются және атаулылық кезінде 37 °С 15-20 мин. содан Кейін әрбір пробиркаға қосылады екі тамшы 2 N сірке қышқылы ертіндісі және встряхивается. Бұл бақылау жүргізу тиіс пайда слизистый комочек. Тәжірибесі болған жағдайда гиалуронидазы ол жоқ болса, бұл туралы куәландырады деполимеризации гуалурон қышқылы кубтық метрінде салмақта микробтық денелер ферментом.

Зерттеу үшін токсигенности стафилококктар пайдалану қолайлы әдіспен ұсынылған Илеком және Леви (1950) анықтауға мүмкіндік беретін , түрлері гемолизинов.

Осы мақсатта дайындалады тостаған с қоректік агармен қамтитын 5% жуылған эритроциттердің физиологиялық ерітіндімен қой, қоян және адам.

Бетіне қоректік ортаның диаметрі бойынша орналастырады стерильді жолақты сүзгі қағаздар, смоченную альфа-антитоксикалық сарысумен. Отступив 1-2 мл жиегінен жолақтар перпендикуляр оған засеивают үзік зерттелетін мәдениет. Себінділерді кезінде 37 °С-тәулік бойы, содан кейін нәтижелерін ескереді.

Альфа-гемолиз байқалады түрінде толық ағару ортаның айналасында штрихтың мәдениет және нейтрализуется альфа-антитоксикалық сарысумен. Ол анықталады арналған орталарда кроличьими және бараньими эритроцитами Бета-гемолиз арналған агаре отырып, қойдың қанымен береді ішінара просветление, аймағы бар құба-күлгін түсі бар. Бұл «жылу холодовый» токсин және жақсы анықталады, кейін қосымша тәуліктік ұстап кесе температура кезінде тоңазытқышта +4 °С характерному послойному гемолизу бараньих эритроциттер мен централизуется альфа-антитоксикалық сарысумен. «Кроличьих эритроциттерде ол белсенді емес. Дельта-гемолизин бойынша анықталады тар полоске гемолиз бараньих және кроличьих эритроциттер, нейтрализуется альфа-антитоксикалық сарысумен. Алайда, білім дельта-гемоли-зина осы чашках мүмкін замаскировано әсерімен альфа-токсиннің сондықтан оны тексеруге арналған орталарда эритроцитами адам немесе жылқы. Осылайша, анықтау үшін барлық 3 типті гемолизинов пайдалану жеткілікті эритроциттер қой және адам немесе жылқы.

Анықтау үшін вирулентности стафилококктар бар бірнеше әр түрлі әдістерді ақ тышқандарды жұқтыру.

Ең қарапайым енгізу болып табылады 0,1 мл тәуліктік бульонной мәдениет сыналатын стафилококкты артқы венаға. Есепке жануарлардың қырылуын жүзеге асырылады 10 тәулік ішінде тіркейді болуы абсцестер бүйректе.

Ыңғайлы пайдалануға тәсілімен Badenski және инвестициялық. (1958) , Тәуліктік бульонная мәдениет центрифугируется кезінде 3000 об/мин — 30 мин. Алынған тұнба ресуспендируется «половинном көлемінде декантата және көлемінде 0,05 мл алғаш 6 мышам артта көз алмасының» окологлазничную өзек. Мәдениетін, вызывающую жойылуы жартысы және одан астам жұқтырған тышқандар 6 күн бойы, деп санайды вирулентной.

Осы әдістері жұқтыру вирулентной шынықтырумен жануарлардың дамиды қауымдар септикалық процесс зақымдайтын, бүйрек. Негізгі жойылуы мышеи жүреді 3-5-ші күні жұқтыру кейін.

 

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *